hEF1a启动子,从人翻译延伸因子1A1(eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 1(EEF1A1))的启动子区克隆得到,长度为1.3kb,组成型表达,无细胞组织特异性。
fDIO,或者称fDiO (Flp controled Double-floxed inverse Orientation),是和Flp配合控制目的基因表达的元件,一般由两对互不相容的Frt序列组成,特征序列是Frt-间隔1-Frt5-GOIr-Ftrr-间隔2-Frt5r。当有Flp存在时,任一对Frt序列都有可能发生重组,因为每对Frt都是相反方向的,所以重组会导致他们之间的序列发生颠倒,例如Frt先发生重组会形成Frt-GOI-Frt5r-间隔1r-Frtr-间隔2-Frt5r,这时两个Frt5的方向由之前的相反变成相同,它们之间发生第二次重组就会使Ftrr缺失,形成Ftr-GOI-Frt5r,由于Frt和Frt5之间不能发生重组,目的基因的位置就固定下来。Frt5先发生重组,结果也是一样的。通常我们会插入目的基因使它的序列和启动子相反,也就是刚开始的时候不表达,Cre作用后目的基因开始表达。
ChR2是Channelrhodopsin的一种,属于视紫质蛋白(rhodopsins),是一类光控的离子通道,能通透Na+离子,还能通透K+,Ca2+,H+等阳离子,来源于模式生物莱茵衣藻。在这些单细胞藻类中,Channelrhodopsin是形成向光性的关键分子。当移植到其他生物体上以后,可以实现用光调控细胞兴奋性,胞内pH值,钙离子内流等生物学过程。ChR2对470nm蓝光吸收最明显。
hChR2(H134R)是ChR2最常见形式,h指代该基因的编码序列经过适用人密码子表的优化,H134R指第134位的组氨酸突变为精氨酸,这个突变降抑制了ChR2对H+的结合,增加了Na+的通过能力,从而增加了分子整体的电导率,进而增加了光照下激发的内向电流。一般用470nm左右的蓝光激发。