在神经元的研究中,有时候需要标记出细胞的轮廓,特别是Axon和Dendrite的末梢,因为投射距离远,需要比较强的荧光才可以。要表达出强荧光,通常需要两方面的条件,一是荧光蛋白本身比较强,二是表达载体比较强。通常可以用mGFP来实现,mGFP标记膜,不过对胞体标记相对不够。
mNeonGreen是一种新型的荧光蛋白,亮度比EGFP高,是比较适合用来做标记的品种。载体上选择hEF1a启动子,保留WPRE等稳定序列,可以达到比较好的效果(CMV_bGI也比较强,但还没有用到fDIO或DIO等载体上)。
我们本次设计中,载体会同时表达胞浆定位和膜定位两个版本的mNeonGreen,用2A连接。调控序列用fDIO2版本。